Celi Lysis Protokół białka izolacyjną

małe białka mogą być wytwarzane syntetycznie , jednak z różnych powodów nie jest syntetyczny maszyny lepsze niż samego ogniwa. Zazwyczajpierwszy etap w izolacji białka jest liza komórek . Lizę komórek Foto lizy komórek ,membrana wokół rozerwaniem komórek.

słowo " liza " pochodzi od greckiego korzenia rozumieniu " , aby poluzować ". Lizą komórek, sił utrzymujących razem błonę komórkową są rozrywane , powodując pęknięcia. Zawartość komórki są następnie uwalniane do otaczającego roztworu , w tym białka. Zwykle jest to wykonywane przez dodanie roztworu buforowego do lizy o nazwie chemicznej .
Przygotowanie buforu do lizy
wyboru bufora lizy będzie zależała od typu komórki , białka, i stosując .

mnóstwo różnych roztworów do lizy są dostępne w handlu lub mogą być typowe receptury do przygotowania buforu do lizy z typowych substancji chemicznych. Najlepszym bufor stosować będzie się zmieniać w zależności od rodzaju stosowanych komórek ,białek , które mają być izolowane i końcowego zastosowania , ale na ogół ,roztwór do lizy zawiera cząsteczkę (często detergentu NP - 40 lub Triton -X ), który rozpuszcza się komórkę membrana wraz z buforami , czynniki chelatujące i inhibitory proteazy , aby zapobiec białko przed uszkodzeniem po uwolnieniu ze środowiska ochronnego komórki.

zlizowanych Warunki
Wykonanie lizy pod warunki lodem zimny zapobiega uszkodzeniu białka.

buforu do lizy jest zwykle stosowany lodem ilizę proces może przebiegać w zimnych warunkach. Roztwór delikatnie kołysała zachęcić równomiernego zdyspergowania komórek i produkty lizy . Po około 5 do 10 minut ,roztwór do lizy zwykle zobojętnia się w celu zapobieżenia dalszego działania. Środki te zmniejszają uszkodzenie białka i zmniejszenia ilości obcej pozostałości wytwarzane które później muszą być usunięte.
Inne zlizowanych Metody
siły mechaniczne może być również stosowane w celu lizy komórek.

Chociaż liza chemiczna jestDelikatny i najczęściej stosowane mechaniczne surowsze metody lizy komórek, mogą być stosowane w pewnych przypadkach. Te obejmują sonikację , powtarzające się cykle zamrażania i rozmrażania i homogenizacji , co jestprocesem zacierania . Skonsultować się z literatury technicznej , aby znaleźć najbardziej odpowiednią metodę dla konkretnego przypadku . Imperium