Rozwiązywanie problemów Gel Electrophoresis

elektroforezy na żelu poliakryloamidowym lub na stronie , jesttechniką powszechnie stosowane do oddzielania cząsteczek organicznych w próbce biologicznej. Cząsteczki o mniejszej wielkości i wagi migracji szybciej w żelu poliakryloamidowym po przyłożeniuprądu elektrycznego . Usunąć różne zespoły są na ogół obserwuje się pozakończeniu żel inkubowano w szczególności plam. Jest tostosunkowo prosty sposób . Jednakże , brak pasm lub taśm , które są brudne plamy i może oznaczać problem w jednym lub więcej etapach sposobu. Należy przestrzegać podstawowych zasad rozwiązywania metodę elektroforezy żelowej , gdy wyniki nie są takie, jak oczekiwano. Rzeczy, które musisz Katowice jakości bis gatunek: akryloamidu lub prefabrykowanych płytkach
Dwa szklane talerze
akrylamid : Bis
bufor TBE (Tris , kwas borowy, EDTA ) Foto Zasilanie
Górnym komora buforowa
Dolna komora buforowa
Białko próbki DNA
TEMED
nadsiarczan amonu
Gel plama

Pokaż więcej instrukcji

Start z 1 końcowy etap elektroforezy żelowej pierwszy i działa w tył. Do elektroforezy żelowejOstatnim krokiemprocedury barwienia stosuje się zaobserwować pasm próbki. Należy właściwie kilka problemów wystąpić podczas procedury barwienia . Jednak , sproszkowany plamy powinny być dobrze rozpuszcza się w odpowiednim buforze przed użyciem do barwienia żelu. Ustalićprawidłowe stężenie barwnika używano .
2

Sprawdzić zasilanie . Brak pasm może wskazywaćustawienie prądu lub napięcia był zbyt wysoki i badane próbki przeniesione off żel . Wysokie ustawienia mogą także powodować składniki próbki do migracji przez żel zbyt szybko , powodując słabą rozdzielczość i zespoły , które pojawiają się nieczyste . Próbki nie mogą migrować przez żel , jeśliustawienie zasilania jest niski . Próbki mogą dryfować ze studni , w których zostały one załadowane i nie migrują przez żel .
3

Sprawdź ciekłego akrylamid używany do oddania w żelu poliakrylamidowym . Zwykleskuteczność akryloamidu stosuje się do odlewania a wynosi żelu poliakrylamidowym z 5 do 15 procent. Próbki składały się z dużych cząsteczek są ładowane na żelu 5 procent , ponieważ duże fragmenty na niskich obrotach na żelach o wyższej zawartości akryloamidu . Małe cząsteczki są ładowane na wyższy procent żelu , ponieważ niskie stężeniaw żelu nie będzie w stanie rozwiązać mniejsze próbki .
4

Sprawdź odczynników stosowanych do przeprowadzenia polimeryzacji akryloamidu . Żelu poliakrylamidowym jest utworzony przez polimeryzację ciekłej mieszaniny składającej się z bisakrylamid i akryloamidu . Nadsiarczanu amonu i TEMED dodaje się akryloamidu do katalizowania tworzenia się żelu . Zazwyczajakrylamid powinny wykazywać oznaki polimeryzacji (tworzenie żelu ) 15 minut po nadsiarczan amonu i TEMED zostały dodane . Polimeryzacja zachodzi zbyt szybko , które jestwynikiem wysokich ilości nadsiarczanu amonu. Zbyt mało nadsiarczan amonu może powodować polimeryzację niekompletne lub nierówny .
5

Potwierdź ilość próbek obciążonych . Wysokie stężenia próbek może przenieść leniwie przez żel i zmniejszyć rozdzielczość pasma . Stężenie próbki , które jest niskie nie mogą być obserwowane pożel został poplamiony. Te plamy mają ograniczenia co do minimalnej ilości próbki , które mogą być obrazowany jako rezultat wrażliwości na zabrudzenia .
6

Potwierdź jakość próbek obciążonych . Soli i innych zanieczyszczeń obecnych w próbce, mogą wpływać na przepływ próbki wzdłuż żelu. Elektroforeza jestwynikiem prądu elektrycznego biegnącego przez żel , który zawiera przewodzący prąd bufor ; wysokie stężenie soli w tej próbce można wpływać na przepływ tego prądu przez żel. Swój izolowanie próbki zawierały zestawu do oczyszczania , które będą generować stosunkowo czystą próbkę.
7

piśmiennictwa lubnapisane protokół w celu określenia , czywłaściwa PAGE użyty do przeprowadzenia eksperymentu. Procent akryloamidu PAGE jest specyficzny dla rozmiaru testowanej próbce . Literatura może również dostarczyć szczegółowych informacji w odniesieniu do ustanowionego podaży i szybkości próbkowania migracji energii . Imperium