Protokoły kultury komórkowe T -

T - komórek , które należą do rodziny komórek odpornościowych zwanych limfocyty, są wytwarzane podczas adaptacyjnej odpowiedzi immunologicznej. Komórki T pochodzą z komórek macierzystych szpiku kostnego i dojrzewają w grasicy . Istnieje kilka różnych typów limfocytów T , każdy z inną funkcją. Komórki T są odróżniane od siebie przez dołączony receptora antygenu komórki T . Podzbiór komórek T przenosi marker CD4 i pomaga w wywoływaniu odpowiedzi immunologicznej. Źródła komórek T

komórki T mogą być pobrane z różnych źródeł , włączając w śledzionie, węzłach chłonnych i grasicy , ale krew obwodowa jestnajczęściej dostępne źródła komórek T w celu hodowli . Próbki krwi są dokładnie pod kątem infekcji i innych zanieczyszczeń i ostrożnie obchodzić pod szafką bezpieczeństwa . T - komórki są hodowane przez kilka czynników, takich pomiarów toksyczności oraz analiza odpowiedzi immunologicznej szczepionki .
Izolacja

komórki T są zwykle oddzielone od próbek pełnej krwi przez gęstość gradientem separacji, jak komórki T, są mniej gęste niż czerwonych krwinek , takich jak erytrocyty i dlatego ekstrakcji przez wirowanie. Odpowiedni obojętny roztwór soli dodaje się próbki krwi , a następnie do roztworu Ficoll isopaque . Ficoll isopaque ma gęstość większą od komórki T , lecz mniej niż erytrocyty oraz podczas wirowania tworzy warstwę pośrednią pomiędzy obu komórek , dzięki czemu komórki T , które mają być usunięte z góry. Komórki T są następnie wirowanosupernatant usuwa się iliczy się małą próbkę w celu określenia żywotności komórek. Komórki albo stosować bezpośrednio do doświadczeń lub zamrożono do wykorzystania w przyszłości . Odczynniki Imperium Krioprezerwacja

kriokonserwacja przygotowywane są z wyprzedzeniem, aby uniknąć degradacji komórek T w pokoju temperatura . Jeśli nie jest to możliwe , komórki przechowywano na lodzie lub zamrożone. Odczynniki składają się z pożywki hodowlanej komórek i 10-13 procent albuminy surowicy ludzkiej (HSA ) , jak również białka, jako środki do hodowli komórek do 10 procent dimetylosulfotlenkiem ( DMSO) . DMSO zmniejsza odwodnienie, zmiany pH , stężenia elektrolitów i zmiany związane z zamrożeniem . T - komórki ponownie zawieszono w nośniku zawierającym reagentów do hodowli komórek i HSA w kriotubę . DMSO zawierającego odczynnik powoli dodano do komórek i delikatnie wirować . Następnie komórki przeniesiono do naczynia do zamrażania zawierającej izopropanolu zapewniają stopniowe zmniejszanie temperatury i przechowywać .
Rozmrażanie

limfocyty T rozmrożeniukriotubę usuwa z magazynu i inkubowano w temperaturze 37 stopni Celsjusza. Następnieodpowiedni nośnik rozmrażanie powoli dodano do komórek , aż do osiągnięcia dwukrotnieobjętość , przeniesiono do oddzielnej probówce i odwirowano. Benzonase czasami dodaje się do pożywki rozmrażania w celu zapobiegania zlepianiu martwych komórek T . Odpowiedziodwirowuje się osad w pożywce hodowlanej komórek iżywotność komórek jest oceniany . T- komórki są gotowe do zastosowania dla poszczególnych eksperymentów . Imperium