Jak mogę korekty DNA do analizy

? Elektroforezy w żelu agarozowym jestnajpopularniejszą metodą wizualnej analizy fragment DNA , który pozwala technikom wizualnie rozpoznać fragmentów DNA na podstawie wielkości . Żelu agarozowym utrzymuje pola magnetycznego i od DNA posiada ładunek ujemny , to przesuwa się w kierunku dodatniego końca pola magnetycznego. Mniejsze fragmenty DNA poruszać się szybciej poprzez żelu i większe poruszają się wolniej . Fragmenty DNA barwi się znacznikiem fluorescencyjnym środkiem interkalującego znany jako bromek etydyny . Umożliwia to porównanie kilku elektroforezie próbek DNA w żelu. Rzeczy, które musisz Foto żelu agarozowym 0,7 procent do 2 procent Foto Tris- boran -EDTA ( TBA) , octan - Tris- EDTA ( TAE ) , octan sodu, litu (LA ), bufor ( SB ), kwas borowy bromek etydyny

Żel loading Dye Obrazów elektroforezy żel tacy

Izby Obrazów Rękawice ochronne Odzież do oczu pipety Obrazów elektroforezy grzebień
Pokaż więcej Instrukcje
Przygotowanie żelu agarozowym 0,7 proc
1

Odważyć 0,7 g proszku agarozowym , a następnie umieścić w dużym (250 ml ), kolbę stożkową .
2

Dodaj 100ml buforu 1X (regularne siły ) ( TAE , TBE , SB lub buforu LB ) do kolby stożkowej zawierającej agarozowym proszku .
3

mikrofalowej lub ciepła przy użyciu palnika Bunsena przez około minut , aż roztwór stanie się klarowny iagarozowym rozpuści .
4

Wyjąć kolbę od źródła ciepła i pozostawić do ostygnięcia do 55 do 60 stopni Celsjusza .
5

Dodać 1 ul ( mikrolitr ), bromku etydyny, do oziębionego roztworu agarozy z użyciem odpowiedniej wielkości , zazwyczaj 1 ml pipety . Wirować roztwór w celu wymieszania .
6

płynięcia żelu powoli do zasobnika na żelu , dzięki nie ma tworzenia pęcherzyków w trakcie tego procesu. Jeśli nie ma dostarczone oraz tamy z tacy z żelem , używaj taśmy maskującej , aby je tworzyć .
7

Umieść grzebień elektroforezy ostrożnie do żelu , zapewniając solidną pozycję i we właściwej orientacji . Grzebienie mogą elektroforezy różnią się w znacznym stopniu od liczby zębów mają. Pozostawićżelu ustawiony na około 25 minut
8

Zanurzyć żelu w tym samym buforze, stosowanego do wytwarzania roztworu agaorse - . W tym przypadku bufor 1X . Zanurzyć żel w maksymalnie 5 ml buforem .
Przygotowanie i załadunek DNA w żelu agarozowym Analiz
Foto 9

przenoszenia od 5 do 10 ul Twoja próbka (a ) z ich probówek do świeżych probówek . W przypadku , który chcesz użyć całej mieszaniny reakcyjnej ,świeże rury nie jest konieczne .
10

Dodaj buforu obciążającego 0.2x do każdego z świeżych probówek zawierających swoją próbkę DNA do załadunku .

11

Usuń grzebień elektroforezy powoli , upewniając się, że nie łamią żel lub utworzyć dowolną przestrzeń między dole żelu i tacy żelu .
12

Dodaj pięć 12 ul odpowiednim znacznikiem DNAoraz stworzony przez pierwsze grzebienia elektroforezy . Czyjest odpowiedni znacznik DNA zależy od wielkości fragmentów oczekujesz od swojej próby.
13

Załaduj pięć do 10 ul próbek do pozostałych dołków i dodaćrówną ilość tego samego markera DNA w końcowej studzienkę .
14

Umieścić elektrody w komorze elektroforezy przez podłączenie przewodów do odpowiednich gniazd do komory i zestaw elektrod 50 do 150 V.

15

Pozostawićżel do uruchomienia od jednego do czterech godzin.
analiza wyników