Propagowanie rekombinowanych plazmidów

Znaleziono w niektórych gatunków bakterii i drożdży , plazmidy są stosunkowo małe, samoreplikujące pierścienie DNA znajduje się poza komórki głównej chromosomu. Są one wysoce przydatne w inżynierii genetycznej , gdyż jest stosunkowo łatwy do splice wybranych genów z innych gatunków do plazmidów , przenieść je między komórkami gospodarza z takich samych lub różnych gatunków , i stymulowania ich replikacji - lub propagacji - w znacznie wyższych niż - normalny - czy Amplified - ceny . Zrekombinowane plazmidy są jedynie tymi, które zostały zaprojektowane tak, aby zawierać geny z innych gatunków. Zwłaszcza z amplifikowanego propagacji rekombinowane plazmidy mogą szybciej i łatwiej wyraźnej potrzeby białka na dużej, przemysłowej skali . To, czego potrzebujesz
wcześniej istniejących plazmidów i genów bibliotek lub plazmidów i genów już samodzielnie się od swoich żywicieli i splecionych razem
sprzętu do hodowli komórek
środek (a ) Wzmocnienie takie jak chlorek wapnia , porażenia prądem elektrycznym , zimna i ciepła, chloramfenikol , porażenia prądem elektrycznym i /lub enzym polimeraza Taq
Pokaż więcej instrukcji
1

Wybierz procedurę amplifikacji lub procedur , które najlepiej pasowały do ​​konkretnego rekombinowany plazmid i hosta organizmu . Niektóre procedury działają lepiej z niektórych plazmidów i gospodarzy , niż z innymi. Jeśli pracujesz z powieści , wciąż eksperymentalnym rekombinowanego plazmidu i /lub próbują z innego gatunku gospodarza , być może trzeba będzie ustalić najlepszy sposób wzmocnienia lub procesów metodą prób i błędów .
2

Spróbuj proces zwany transformacja , jeśli określone gatunki plazmidów i komórki gospodarza może odpowiedzieć. Chill komórek i plazmidu do zera stopni C w roztworze chlorku wapnia ( CaCb ) . Szybko podnieść temperaturę do 37-43 stopni C. Ta nagła zmiana temperatury powoduje, że błony komórkowe do podjęcia większych ilości plazmidu .
3

Wyślij impulsów wysokiego napięcia przez roztwór plazmidów i komórek , jeśli elektroporacja jestpożądane metody amplifikacji . Ta technika zwiększa przenikalność błony komórkowej dla plazmidów.
4

narażenia na hodowli komórki gospodarza , aby obniżać poziomy antybiotyku chloramfenikolu w celu wytworzenia aż sto plazmidu na komórkę . Sposób ten hamuje replikację chromosomów głównych komórek gospodarza ", podczas wywoływania niekontrolowanej replikacji plazmidu , w tym genie wstawiony do niego.
5

Stosuje się reakcję łańcuchową polimerazy lub metody PCR w celu wytworzenia kopii plazmidu w bardzo wysokich rzędów wielkości . PCR jest oparta na polimeryzacji DNA, reakcji chemicznej z sekwencjami genetycznymi , które tworzą w naturze. PCR jest najczęściej katalizowane przez enzym o nazwie stabilny termicznie polimerazy Taq , pochodzących z gatunku bakteryjnego , która mieszka w gorących źródłach . Imperium