Protokół do transfekcji GFP

Zastosowanie białka fluorescencyjne zielone zrewolucjonizował biologii molekularnej i komórkowej , pozwoliło naukowcom wizualizację komórek i białek w sposób nigdy wcześniej możliwe . Jej wpływ na badania naukowe był tak głęboki , że w roku 2008 Osamu Shimomura otrzymał Nagrodę Nobla w dziedzinie chemii za odkrycie i izolacji GFP z meduzy fluorescencyjnym . Definicje

gensekwencja kwasu deoksyrybonukleinowego w komórkach, które są odpowiedzialne za wytwarzanie określonego białka. Plazmid jestoddzielny kawałek DNA, który zawiera gen będący przedmiotem zainteresowania , takich jak GFP . Transfekcja jestsposób wprowadzenie plazmidu do komórek .
Metody

Transfekcja zazwyczaj obejmuje mieszanie plazmid DNA zawierający gen, taki jak GFP lipidami lub soli. Komórki są wystawiane na tę roztworu, który tworzy otwory w błonie komórkowej , co umożliwia plazmidu do komórki, w którejgen może być wyrażona jako białka. Zestawy transfekcji komercyjne dostępne lub reagenty mogą zostać wykonane w laboratorium. Wybór metody transfekcji, w ​​zależności od typu komórek i plazmidów jest używany. GFP jest wizualizowane i monitorowane w sprzęt , który wykrywa fluorescencję . Imperium Używa

GFP jest zazwyczaj dołączony do białka zainteresowania transfekcji . Komitet Noblowski wyróżnił śledzenie " uszkodzenia komórek nerwowych podczas choroby Alzheimera " i " jak komórki beta produkujące insulinę w trzustce stworzonym z rosnącego zarodka " jako przykłady. Imperium