Wskazówki do hodowli tkankowych

hodowli tkankowejnamnażanie komórek w płynnej pożywce hodowlanej w laboratorium do różnych celów naukowych. Na przykład , hodowle tkankowe są stosowane w diagnostyce chorób genetycznych , w pożywce do hodowli wewnątrzkomórkowe patogeny , takie jak bakterie lub wirusy lub podczas dochodzenia do tych samych komórek. Komórki hodowli tkankowej

Niektóre komórki przywierają do dna szalek Petriego lub pozostają zawieszone w cieczy. Komórki mogą być pochodzenia roślinnego lub zwierzęcego. Komórki stosowane w hodowlach tkanek mogą być komórki pierwotne , to znaczy , że zebrano bezpośrednio z organizmu lub z linii komórkowej jest utrzymywany w hodowli. Linie komórkowe są często komórki nowotworowe , a to musi być brane pod uwagę przy planowaniu i interpretacji eksperymentów .
Treat komórki Delikatnie

Przylegające komórki są usuwane z ich płytkę Petriego do przejścia przez skrobanie lub proteaza , zwykle trypsyny i EDTA . Skrobanie zabija wiele komórek i powinny być stosowane tylko wtedy, gdy przygotowanie lizatów komórkowych ( preparaty ciekłe o zawartości komórek do analizy ) lub gdy trypsyny /EDTA należy bezwzględnie unikać.

Trypsynizacji usuwa nie tylko białka, które przywarły do naczynia komórki jednak większość innych białek w błonie komórki też. Komórki piłkę i trochę czasu , zazwyczaj na noc , aby odnowić więź z naczynia . Dodanie minimalnej ilości trypsyny - około 1 ml do kolby 25cm2 - wstrząsanie kolby pięć sekund lub mniej do powłokijednowarstwowej i odlewania i odessanie nadmiaru trypsyny zmniejsza ilość trypsyną , do którejmonowarstwy narażony. Niech komórki odpocząć w inkubatorze podczas trypsynowanie .

Komórki zsunąć na dno naczynia , dodać materiały z surowicy i nabrać lizatu w górę iw dół pipety delikatnie . Pozwalają trochę mediów pozostaje w naczyniu , jak pipetowaÄ górę iw dół kilka razy, aby rozbić grudki i dostać nawet zawieszenie .

Nie ssać pęcherzyków do pipety . Ponadto, nie energicznie mieszać lub wirować zawiesinę komórek ; komórki są bardzo delikatne w tym zaokrągloną się stanie . Imperium do inaktywacji cieplnej do ogrzewania lub nie dezaktywują

technik hodowli komórkowych były w powijakach , płodowej surowicy bydlęcej ( FBS) wiadomo, że zawierają białka , które są komplementarne białka układu odpornościowego , że lizy komórek . Dopełniacza, białek nie są pożądane w hodowli komórkowej. FBS heat - inaktywacji w temperaturze 56 stopni Celsjusza przez 30 minut, będzie świadczyć, białek dopełniacza nieaktywne . Podgrzewanie FBS do 37 stopni C, również wystarczy do inaktywacji białek dopełniacza .

W pierwszych dniach , ciepła inaktywacji FBS zabił także mykoplazmy i innych zanieczyszczeń . W tym czasie przeprowadzono sterylizację filtracyjną z filtrem 0.45um . Dziś filtrować sterylizować FBS i mediów przez 0.1um lub filtrów nawet 0.04um . Nie będzie poślizgu przez mykoplazmy , że

Pozostaje nam pytanie , czy inaktywować cieplną inaktywację

ciepła rozkłada wszystkie komponenty FBS - . . , Takie jak witaminy, aminokwasy i czynników wzrostu - . ewentualnie poniżej progu niektórych wybrednych linii komórkowych

Jeśli pracujesz z linii wolno rosnących lub drobiazgowych komórek , należy rozważyć jedynie filtrować sterylizacji swoje FBS. Może się okazać, to zwiększa odporność komórek . Imperium