Jak testować stężenia amylazy Enzymy
UV /VIS Zbiory 15 dużych probówek
stojak do probówek
1 mg /ml roztwór skrobi
woda dejonizowana
KI /jod odczynnik
pipet
kroplomierzem Obrazów Tissue
kuwet Obrazów papier milimetrowy Obrazów próbka krwi
wirówki Obrazów Stoper
Pokaż więcej instrukcji Łódź przygotowania skrobi standardu krzywa
1
włączyć spektrofotometr i ustawić go na długość fali 620 nm . Pozwalająinstrumentem do ogrzania się na co najmniej 10 minut, tak , że odpowiedź będzie stabilny podczas eksperymentu .
2
Ustaw z sześciu probówek , oznaczania ich 1-6 i umieścić je w teście stojak rury . Rozmieszczanie rozwiązań skrobia, dejonizowanej wody i roztworu KI /jodu na ławce góry
3
Napełnić rurę 1 z 3 ml wody zdemineralizowanej za pomocą pipety .; ta będzie służyć jakopuste . Rurki napełnić 2-6 z 3,0 ml, 2,9 ml, 2,7 ml, 2,4 ml i 2,1 ml dejonizowanej wody , odpowiednio . Dodać roztwór skrobi na każdej z rur 2-6 , w następującej kolejności : warstwa wewnętrzna 2 otrzymuje 0 ml , rura 3 otrzymuje 0,1 ml , rurka 4 otrzymuje 0,3 ml , rury 5 i otrzymuje 0,6 ml rurki 6 otrzymuje 0,9 ml
<. br> 4
dodać jedną kroplę roztworu KI /jodu każdej z sześciu rurek. Każdej probówki starannie wymieszać przed nagraniem ich absorbancję w spektrofotometrze dokładnie .
5
Napełnić kuwetę z roztworu do próby ślepej , wyczyścić obudowę kuwety i umieścić go w pustym otworze spektrofotometru . Regulacja absorbancję do zera. Wszystkie inne rozwiązania przyniesie korzystny absorbancji .
6
Napełnić kuwetę próbki z każdego z pozostałych pięciu roztworów po kolei . Wytrzyj zewnętrzną kuwety przed każdym pomiarem . Rejestruje wartość absorbancji dla każdej probówki . Przemyć kuwetę z nowego rozwiązania , co najmniej raz przed napełnieniem do testu.
7
Zrób wykres , że działki odczyty absorbancji od stężenia skrobi . To jestkrzywa standardowa , który pozwala określić stężenie roztworu , który ma dany odczyt absorbancji .
Ustalenie amylazy Koncentracja
8
Wyczyść wszystkie probówki z pierwsza część testu. Zachować pustą rurę do wykorzystania później .
9
uzyskać próbkę krwi od pacjenta . Umieścić próbkę w wirówce i oddzielenie czerwonych krwinek od osocza krwi.
10
Wypełnić probówki z 9 ml dejonizowanej wody i 1 ml osocza krwi. Jest torozcieńczenie 1:10 osoczu. Mieszać probówki dokładnie i pipety 1 ml roztworu do drugiej probówki. Etykieta dwie rurki z ich zawartością .
11
Przygotowanie do wykonywania czasowego testu . Posiada stoper poręczny i skonfigurować siedem probówki z kuwet w szafie probówki . Weźmiesz odczyty co dwie minuty po rozpoczęciubadania . Zanotować dokładny czas i odczyt absorbancji dla każdej z siedmiu punktach danych. Wypełnić każdą z siedmiu probówek 2 ml dejonizowanej wody.
12
dodaje się 9 ml roztworu skrobi w probówce , która ma 1 ml 1:10 rozcieńczenie osocza. Jak najszybciej rozpocząć dodawanie roztworu skrobi , uruchomić stoper . Mieszać probówki i wykazuje pipety 1 ml roztworu skrobi /osoczu dopierwszego z siedmiu probówek . Zarejestrować czas . Dodać 1 kroplę roztworu KI /jodu do probówki i wymieszać .
13
transfer do kuwety , wytrzeć zewnętrzną i zapisać absorbancję . Powtórz ten proces z pozostałych sześciu probówek w dwóch minutowych odstępach . W sprawie zawarcia czasowym badania należy mieć odczyty dotyczące rzeczywistego czasu i absorbancji dla rozpiętości czasowych 0 , 2 , 4 , 6 , 8, 10 i 12 minut.
14
Użyj standardu krzywa znaleźć stężenia skrobi dla każdego z siedmiu punktach danych. Punkty te będą się zmniejszać wraz z upływem czasu . Amylaza trawi skrobię i w czasie zużywa wszystkieskrobia dostępna .
15
Wykres punkty danych o czasowym badania jako stężenie skrobi w funkcji czasu . Nachylenie tej krzywej wskazuje ilość amylazy w próbce osocza . Imperium
