Protokół testu wiązania kompetycyjnego

Próba wiązania konkurencyjnego maeksperyment, który determinuje zdolność do wiązania białek i związków chemicznych dla specjalistycznych białek występujących na powierzchni komórek , zwanych receptorami . Sposób często stosowany w badaniach medycznych , ale również w stanie określić , które leki wiązania się z receptorami i modyfikacji aktywności receptora, który z kolei może wpłynąć na zachowanie komórek. Przygotowanie komórek

ponownie zawiesić komórki do lodowatej soli fizjologicznej buforowanej fosforanem ( PBS ) . Pomiarów stężenia białka w celu potwierdzenia równe stężenia białka z zastosowaniem testu dostępnego w handlu wyspecjalizowany białka .
Analiza

Dodać białko znakowane radioaktywność , wiadomo, że wiąże się z receptorem ligand , do zawiesiny komórkowej lub tkankowej . Dodać konkurenta , który jestbadany lek lub białka w badaniach i inkubowano z ligandem radioaktywnym i zawiesiny. Zakres stężeń badanego leku powinna być badane. Po inkubacji , osobna ligandu związanego i niezwiązanego i pomiaru radioaktywności . Imperium Analiza danych

zwykły środek do ustalenia jest połowamaksymalne stężenie , które hamuje receptor zwie IC50 . Oblicza się wykreślając stężenia w skali logarytmicznej na osi X wykresu natomiastoś Y oznacza procent zahamowania wzrostu ; krzywą sigmoidalną , która jestw kształcie litery S , powinny być generowane . IC50 jestpunkt hamowania 50 procent , aodpowiadające stężenie można odczytać z wykresu . Imperium