Jak zmierzyć NADH

NAD i NADH są zarówno nukleotydy pirydyny zaangażowane w metabolizm . NADH NAD i są koenzymy występujące w mitochondriach , siłą napędową w komórce. Zarówno NADH NAD i uczestniczą w reakcjach komórkowych, takich jak oddychanie i fotosynteza , gdzie energia i wodór wytworzone. NAD i NADH paliwa reakcje biochemiczne , które wymagają wielu enzymów do produkcji ATP , głównego źródła energii w komórkach . Rzeczy, które musisz Katowice komórki lub tkanki w ramach studiów
NADH zestaw testowy
soli fizjologicznej buforowanej fosforanami Obrazów Suchy lód Obrazów blok ciepło
96 oraz płytkę
Wirówka
Oznaczone rury Obrazów, czytnik płytek Obrazów Vortex
znane stężenie NADH

Pokaż więcej instrukcji Katowice Test
1

myć komórki lub tkanki w ramach badania z zimną fosforanu buforowanej soli fizjologicznej , PBS . Ekstrakt komórek lub uszkodzenia tkanki w buforze do ekstrakcji przez umieszczenie mieszaniny w suchym lodzie przez 20 minut, a następnie w temperaturze pokojowej przez 10 minut. Powtórz .
2

Vortex przez 10 sekund . Wirowania w wirówce na 5 minut, aby resztki osadu komórek lub tkanek . Usunąć supernatant , fazy ciekłej i umieścić płyn w czystej probówki .
3

Filter supernatant przez wyspecjalizowany filtr do usuwania enzymy, które będzie podział NADH .
4

Usuń 200 mikro litrów się w czystej probówki i ogrzewano w temperaturze 60 stopni Celsjusza w bloku grzejnym w ciągu 30 minut w celu denaturacji NAD . Fajne i wirować i usunąć fazę ciekłą . Przenieść 50 mikro litrów na płytkę 96 -studzienkową; każda próbka powinna być w dwóch lub trzech powtórzeniach. Aby określić całkowitą NAD , NADt , nie nagrzewają .
5

przygotować i dodać mieszankę rowerową do 96 dołkach . Mieszać i inkubować w ciągu 5 minut. Dodać 10 mikro litrów wywoływacza i pozostawić do inkubacji w temperaturze pokojowej przez 4 godziny. Dodaj rozwiązanie zatrzymania. Czytaj zmianę koloru na czytniku płytek lub fluorymetrze zależności od zestawu .
Krzywej standardowej i obliczanie
6

Przygotować krzywą wzorcową poprzez znanego stężenia NADH i rozcieńczenie w buforze do ekstrakcji. Rozcieńczyć w różnych stężeniach , w objętości końcowej zapewnienie pozostajetaka sama , jak próbek testowych. Płyta na tej samej płytce 96 -dołkowej i próbki do badań. Czytaj gęstości optycznej .
7

Draw standardowy wykres krzywej z koncentracji na osi X i gęstości optycznej na osi Y . Weź średnio każdej badanej próbki i odczytać stężenie od standardowego wykresu krzywej .
8

Oblicz stosunek NAD /NADH poprzez odjęcie całkowitej NAD , NADt , od NADH , a następnie podzielenie przez NADH .
Imperium