Protokoły oczyszczania MBP
MBP lub białko wiążące maltozę można znaleźć w bakteriach Escherichia coli, która jest częścią flory jelitowej u ludzi i zwierząt. Oczyszczanie MBP obejmuje szereg procedur mających na celu oddzielenie składników białka. W biologii molekularnej , oczyszczania MBP jestistotnym procesem w badaniach struktury i funkcji tego białka. Protokołów oczyszczania MBP obejmują oczyszczanie białek fuzyjnych MBP małej skali i MBP - fuzję białka fuzyjne wiążące maltozę oczyszczanie znacznik . Oczyszczanie białek fuzyjnych MBP
W tym protokole , technicy przemyć 20 ml żywicy za pomocą roztworu polimeru amylozy Atris przy pH 7,4 , chlorek sodowy, merkaptoetanolu ( ME) i kwas etylenodiaminotetraoctowy (EDTA ) zgodnie z protokołami Online . Próbki komórek dodaje się, odwirowuje i analizowano w elektroforezie żelowej. Próbki są analizowane w Chromatograf , gdzie technicy eluatu lub stosować składniki roztworu dodano w trakcie przepływu przez kolumnę chromatograficzną .
Mała skala fuzyjne białko MBP Oczyszczanie
Według Uniwersytet Hebrajski w Jerozolimie , biolodzy użyć izopropylowy odczynników bD- 1 - tiogalaktopiranozyd (IPTG ) , kulturę komórek wirowanie przez 10 min przy 8000 obrotów na minutę w 39,2 stopni Celsjusza . Później usuwania cieczy znad osadu i wymieszać buforu PBS zimnego do próbki , który jest podzielony na kilka probówek i wirowano ponownie. Próbki są następnie przechowywane w -112 stopni Celsjusza do analizy tylnej. Imperium białko wiążące maltozę Fusion Tag Oczyszczanie
znaczniki powinowactwa są genetycznie zmodyfikowane cząsteczki stosowane w biologii molekularnej do wykrywania i oczyszczania białek. Protokół ten jestzłożony zestaw procedur podzielona na trzy etapy , które obejmują budowę markera białkowego polihistydyna ( HisMBP ); Eksperyment pilota do oceny rozpuszczalności białka; ioczyszczanie na dużą skalę cząsteczek MBP , zgodnie z protokołami natury . Oprócz próbek E.coli technicy użyciu ampicylinę , kanamycynę, IPTG , anhydrotetracykliny , monohydrat glukozy , bufor do lizy komórkowej polimerazy DNA , startery PCR , Tris - octan - EDTA i bromek etydyny .
