Cell- ELISA opartej na protokół

ELISA lub testu immunoenzymatycznego , stosuje się jako narzędzie diagnostyczne w medycynie oraz w badaniach biologicznych w celu określenia ilości konkretnego białka. ELISA wykorzystuje przeciwciała do wykrywania białka będącego przedmiotem zainteresowania i reagent, który wytwarza barwę. Ilość barwnika odnoszą się do ilości białka. Hodowla komórek

Komórki powinny być umieszczone w studzienkach 96 -studzienkowej płytce za pomocą 100 mikro litrów pożywki wzrostowej i komórki pozostawia się do osiadania w ciągu nocy. Jeśli uczysz się reakcji komórek na czynnik , komórki powinny być surowicy przez 24 godziny, a następnie stymuluje się czynnika badanego .
Utrwalanie i przeciwciała pierwszorzędowego

Po usunięciu nośnika , komórki poddaje się działaniu środka utrwalającego , takie jak 3 procentowym roztworem formaldehydu lub metanol . Błona komórkowa musi być permeabilizowano w celu umożliwieniapenetracji przeciwciał do komórek . Permeabilizację może być osiągnięty przez zastosowanie 0,1 procentowy Triton jeśli metanol nie był wcześniej używany . Niespecyficzne wiązanie można zapobiegać przy użyciu 10 procent płodowej surowicy cielęcej rozpuszczonej w roztworze soli fizjologicznej buforowanej fosforanem . Po usunięciu bloku ,pierwsze przeciwciało może być stosowane i inkubuje przez jedną godzinę. Imperium drugich przeciwciał i Stain

Usuń przeciwciała pierwszorzędowego i mycia trzy razy . Dodawanie wtórne przeciwciało połączony ze środkiem do wykrywania, takie jak peroksydaza chrzanowa . Inkubować przez godzinę. Wash Dodaj chemiluminescencyjnego roztworu substratu . Opracowanie i zeskanować płytę dla intensywności koloru . Imperium