Jak zrobić Antibody rozcieńczenia dla IHC

immunohistochemiczne ( IHC ) to technika używana przez naukowców specjalista do wizualizacji komórek w obrębie tkanek , które zostały umieszczone na szkiełku i barwiono odpowiedniego przeciwciała, które rozpoznaje białko , który jest unikalny w ramach komórki lub tkanki dochodzenie . Rozcieńczenia przeciwciał ( miareczkowania ) , muszą być wykonane z użyciem warunków doświadczalnych , określonych w własnym protokołem użytkownika , a nie , że od producenta przeciwciała , gdyżdwa nie mogą być identyczne . To, czego potrzebujesz Katowice komórki do barwienia
przeciwciała Obrazów buforze do rozcieńczenia ( " rozcieńczalnik " ) Foto pipet i wskazówki
mikroprobówki
Folia aluminiowa
markerów laboratoryjnych oraz etykiety rury Obrazów Ice Obrazów chronione okno światło slajdów

Pokaż więcej instrukcji
1

sprawdzenie i przygotowanie przeciwciała. Upewnij się, że przeciwciało zostało podniesione w odpowiednim gospodarzu , i reaguje z dokładnym wersji białka (tzw. izoformy , lub wariant spawów ) ​​, który jest w fazie testów. Używając pipety , starannie wziąć część 10 jl to i etykietę jako " osobisty ręki ' .

Jeśli tylko bardzo małe ilości przeciwciała są dostępne , należy pominąć ten krok .

Prowadzenie prywatnego akcji przeciwciała jest rutynową praktyką w laboratoriach , ponieważ zapobiega kontaminacji krzyżowej oryginalnym stanie . Rozdzielić to w chroniącej przed światłem rurki do wirowania , lub zwykłej rurki do wirowania , które są owinięte w folię aluminiową, która chroni przed dostępem światła . Łódź

zachować tę probówkę na lodzie, korzystnie w Esky z wieczkiem hermetyczny ponownie, aby zminimalizować światło , które może zniszczyć przeciwciała. Zanotuj koncentracji oryginalnego obraz (np. 100 jednostek na mililitr , 1 miligram na mikrolitrze i tak dalej ) na rurze , w tym nazwę przeciwciała , a co , jeśli w ogóle , bufor jest rozcieńczone ( np. surowicy, soli fizjologicznej , lub woda itp. ) .
2

Przygotować bufor do rozcieńczania , znany również jako rozcieńczalnik przeciwciała. Upewnij się, czy jest to zgodne z przeciwciałem i procedury immunohistochemicznej jest używany, na przykład , nie powinno przesłaniać żadnej fluorescencji lub hamować wszelkie dalsze oznaczanie przeciwciał wtórne . Dodać wysysania immunohistochemicznych (takżebufor blokujący ) przez zmieszanie 1x roztwór soli buforowany fosforanem z 1% Triton- X100 , 10% płodowej surowicy cielęcej i 0,2 % azydku sodu.
3

miareczkować przeciwciała. Z danego stężenia przeciwciał w osobistym magazynie (wyrażoną w jednostkach stężenia takich jak mikrogramów na mikrolitrze ) , określić ilość przeciwciała wymaganego do uzyskania 10 mikrogramów przeciwciała.

Ustaw serię rozcieńczania pipetując objętość równoważne 2 mikrogramów przeciwciała ( np. X mikrolitrów ), w ilości 100 mikrolitrów rozcieńczalnika i dokładnie wymieszać przez pipetowanie w górę i w dół. Od tego rozcieńczenia wyjściowego, podejmują takie same X mikrolitrów i dodać , że do kolejnych 100 mikrolitrami rozcieńczalnika . Powtórz tę czynność , aż 8-10 rozcieńczeniach (lub serii ) składa się .

Ostatnia rura będzie zatem najniższe stężenie i być" nasycanie " Stężenie , które generują najwyższy poziom sygnału w czasie eksperymentu. Jednakże ,idealny stężenie będzie nieco bardziej stężony niż ta , tak że zbyt dużo sygnału zostało przedstawione, które mogą powodować błędy w tle . Łódź

Etykieta rury prawidłowo nowych rozcieńczone stężenia .