Czym jest Gel Electrophoresis
? Elektroforeza żelowa jestmetodą oddzielania , identyfikacji i charakteryzowania mieszaninę białek lub kwasów nukleinowych. Próbki denaturowane migracji po zastosowaniu w cienkiej elektrycznej mokrego żelu , zwykle wykonane z poliakryloamidu lub agaroza . Oddzielone próbki są poplamione , więc mogą być postrzegane . Elektroforeza w żelu stosowany jest w badaniach białek i kwasów nukleinowych oraz w szpitalach w celu identyfikacji nietypowych wzorców DNA, białka lub do diagnozowania chorób, wad genetycznych i relacje genetyczne. Przygotowanie próbki
detergentu takiego jak dodecylsulfonate sodu ( SDS) dodaje się do kwasu nukleinowego lub białka ,detergent będzie wiązać się i rozwinąć (denaturacja ), białka i kwasu nukleinowego. Denaturacja białek ułatwia określenie ich masy cząsteczkowej w elektroforezie . Wielkość próbki wymagane jest od 100 do 500 ng na pasmo białka dla próbki i 5 do 100 ng każdego pasma dla kwasów nukleinowych , w całkowitej objętości 25 do 40 mikrolitrów .
Żele
żelu , zwykle wykonany z poliakryloamidu lub agarozowym , można wytwarzać lub nabytych oddzielenia tych białek. Żel jest jak żelatyna . Najczęściej jest to woda , ale jest na tyle solidny, do obsługi . Żele zawierają bufor do regulowania pH . Żel jest bardzo cienka ( 1 do 2 mm) i prostokątny. Z jednej strony wygląda jak grzebień z wielu brakujących zębów . Luki są nazywane studnie . Imperium Sample Loading
miejscażel w komorze z bufora i zdenaturowanych białek dodaje się do studzienek. Próbki o znanej masie cząsteczkowej dodaje się do dołków na zewnątrz . Żele są wykonane z różnych ilościach poliakryloamidu . Niskiej wytrzymałości żelu ( 4 procent) jest lepsza dla oddzielenia cząsteczek o dużej masie cząsteczkowej , podczas gdywyższa wytrzymałość żelu (12 procent ) stosuje się dla większych cząsteczek, masy cząsteczkowej. Gradient żelu zmienia w siłę żelu i można oddzielić szeroki zakres białek z utratą jakiś rozmiar.
Electromigration
Dzięki zastosowaniu wysokiego napięcia elektrycznego , zdenaturowane białka, przemieszcza się w kierunku dna otworu. Wyższyciężar białka ,wolniej porusza . Kiedyprąd jest wyłączony , białka zatrzyma. Jeden żel usuwa z komory i skały je w naczyniu z barwnikiem . Barwniki organiczne, takie jak barwienie błękitem lub barwników metali służą do plam , podczas gdy białka fluorescencyjne barwniki takie jak bromek etydyny są używane do kwasów nukleinowych .
Analiza wyników
Z usunięcie nadmiaru barwnika , można zobaczyć , że mieszaniny rozdzielają się na zespoły , które wyglądają jak drabiny . Położenie pasma jest porównywany do odległości przebytej przez normy dla określenia masy cząsteczkowej próbki w każdym paśmie . Żel może być odwodnione z alkoholem i suszy więc może być zbawiony. Intensywność barwy zespołu to może być mierzona w celu określenia stężenia białka w każdym paśmie .
Protokół Rozwoju
Standardowe protokoły są dostępne do pracy z dobrze znanych białek . Jeślinaukowiec pracuje z próbki nieznanego ,wytrzymałość żelu , typu bufor , bufor pH , napięcie , czas pracy , a plama może wszystkie muszą być zoptymalizowane , aby uzyskać najlepszą separację i sygnał .
protokoły Imperium
