TMRE Protokół

tetrametylorodamina etylu ( TMRE ) jest"wolna lipofilowe fluorescencyjny reditribution kationowy barwnik" stosowany w MitoPT ™ TMRE /TMRM mitochondrialnego potencjału błonowego zestawie oceny , wytwarzanego przez immunochemiczne Technologies , LLC. Proces pomaga zobaczyć przezbłonowej gradient potencjału elektrycznego w komórkach . Przygotowanie testu

protokół jest prosty do naśladowania, i trwa około 20 minut do przetwarzania w 37 stopniach Celsjusza. Żywe komórki stosowane w tym oznaczeniu może trwać od kilku godzin do kilku dni, aby przygotować do użycia. Komórki kontroli może potrwać kilka godzin na przygotowanie , jak trzeba je skłonić do apoptozę . Część 1

komórki Kultura
protokołu do optymalnej gęstości do apoptozy lub indukcja stresu oksydacyjnego , w zależności od konkretnego protokołu indukcji , ale nie może przekroczyć 10 ( 6 ) komórek /ml . Imperium Protokół Część 2

sam czas , kulturanie populacja komórek wywołanej kontrola negatywna ( przy tej samej gęstości jak wywołanego populacji .
Protokół Część 3

indukować apoptozę lub celowo depolaryzacji mitochondria następujące żądany protokół . Część
Protokół 4

Przygotuj 1X /Wash probierczego bufora .
Protokół Części 5 do 8

przygotować 1 mm lub 0,2 mM MitoPT ™ TMRE /TMRM akcji. do protokołu część 6 , przygotować rozcieńczenie 1:100 do 1 mm, lub 1:20 rozcieńczenie 0,2 mm MitoPT ™ TMRE /TMRM rozwiązanie dla wybijanie do próbek hodowli komórkowych .

protokołu części 7 , plama przy użyciu komórek końcowe stężenie 20-200 nm roztworu MitoPT ™ TMRE /TMRM .

protokołu części 8 , analizować danych. Imperium