Protokoły Hoechst barwienia
Plamy Hoechst są barwniki fluorescencyjne stosowane do znakowania DNA i RNA dzięki mikroskopii fluorescencyjnej i cytometrii przepływowej technik . Hoechst 33258 oraz Hoechst 33342 sąnajczęściej używane z tych plam . Posiadają one zdolność do wiązania się z cząsteczkami DNA , powodując jądra i mitochondria pojawiają fluorescencyjne w świetle ultrafioletowym. Protokoły barwienia Hoechst są powszechną praktyką w laboratoriach biotechnologicznych i genetycznych , a obejmują techniki barwienia komórek przy użyciu zarówno Hoechst 33258 oraz Hoechst 33342 . Hoechst 33342 HSC Barwienie i Stem Cell Oczyszczanie Protokół
Protokół ten jest używany do barwienia komórek od myszy szpiku kostnego. Technikami przygotowania próbki szpiku kostnego z roztworu HBSS + sól , bufor HEPES i surowicę płodu cielęcego . Wirują one roztworu i dodanie wstępnie ogrzanym podłożu DMEM . Następnie dodaje się Hoechst plama . Roztwór umieszcza się w 98,6 stopni Fahrenheita łaźni wodnej dokładnie na 90 minut , informujeZakład Immunologii Uniwersytetu w Pittsburghu . Fluorescencyjny odcinki DNA pod pojawiają histogramy .
Hoechst 33342 DNA Barwienie
W tym protokole , technicy zawieszone Hoechst 33342 plamy w wodzie destylowanej , dodać 2 procent do płodowej surowicy cielęcej próbkę komórek , utrzymując pH na poziomie 7,2 za pomocą roztworu buforowego. Komórki są następnie inkubowane w temperaturze 98,6 stopni F na godzinę , i natychmiast analizowane ze sprzętem zwanym cytometr .
Stained DNA jest to widoczne i fluorescencyjny , zgodnie z University of Michigan Health System .
Używanie wykrywania DNA wiążący DNA fluorochromu Hoechst 33258
protokoły używane kawałek sprzętu o nazwie spektrofotometr do analizy segmentów DNA i RNA . Hoechst 33258 technicy użyć roztwór roboczy i próbki DNA z grasicy cielęcej . Oni też wydzieloną rozwiązanie przy użyciu próbki DNA i bromek etydyny chemicznej nazwie . Później porównać wyniki barwienia komórek w obu mediach , za pomocą spektrofotometru , zgodnie z aktualnymi protokołami cytometrycznie . Imperium
