Jak Stain żelu agarozowym

Wizualizacja kwasu nukleinowego lub białka jest niezbędna podczas wykonywania elektroforezy w żelu agarozowym . Jeśli pracujesz bez barwienia żelu , nie będziesz w stanie zobaczyć, gdziepróbki są badania został osiągnięty, a zatem pomiary wielkości cząsteczek , na przykład , będzie znacznie ograniczony. Plamić żelu stosując wspólną, dobrze testowane barwnik , taki jak bromek etydyny ( EtBr ), który fluoryzuje mocy promieniowania ultrafioletowego ( UV) przy interkalacji do cząsteczki DNA lub RNA. Barwnik pomoże Ci w wykonywaniu eksperymentu , pokazując się cząsteczek w próbce, jak granatowych znaków . Rzeczy, które musisz Katowice rękawice ochronne i okulary

żelu agarozowym
pipetą bromek etydyny ( Gilson dla małych ilościach )
Bufor obciążający

Pokaż więcej instrukcji

1

Nosić rękawice ochronne , które są cienkie, ale ochronne i umożliwić palców i rąk nieograniczony ruch . Użyj małego pipety EtBr wyciągnąć jakieś plamy (lub równoważny ) z pojemnikiem .
2

Dodaj 0,5 mikrogramów na mililitr wybranego barwnika do próbki . Przykryć próbkę i wymieszać ręcznie. Kilka dachówek powinny być wystarczające .
3

Dodaj ujemnie naładowanej buforu obciążającego do mieszanki za pomocą pipety . Umożliwiabarwione próbki widać gołym okiem , w naturalnym świetle i eliminuje konieczność kosztownego , szkodliwym promieniowaniem UV , które w przeciwnym razie degradacji cząsteczki , w którym jesteś zainteresowany. Ksylen cyjanol jestpowszechnie używany bufor ładowania , a inne są dostępne. Upewnij się wybrać buforu obciążającego , że będzie pracować z taką samą prędkością , jak cząsteczki mierzysz . Ksylen cyjanol przebiega z taką samą prędkością jak fragmenty DNA , które 5000 par zasad ( bp) długości .
4

pomocą czystej pipety zastosować wzmocnioną próbki do studzienek na początku swojego żelu agarozowym . Objętość zastosować zależy od wielkości grzebieni żelu ( również grubość , długość, grubość żelu ). Poplamić próbek ikontroli , dzięki czemu można określić parametry , które są zainteresowane (takich jak masa cząsteczkowa) prawidłowo i skutecznie .
5

Ewentualnie wykonać Southern blot jako sposób wizualizacji swoją próbkę . Transferu DNA z membraną nitrocelulozową. Wystawiać go do sondy do hybrydyzacji . To nie jest barwienie , jako takie , ale zapewnia odpowiednią alternatywę , jak opisał dostępu doskonałości . Imperium