Protokoły testu NBT

NBT lub błękit nitrotetrazoliowy jestzwiązek chemiczny stosowany w badaniach biochemicznych i immunologicznych do wykrywania enzymu fosfatazy alkalicznej . Substancja jest również stosowany w teście diagnostycznym przewlekłej choroby ziarniniakowe , co wpływa na komórki immunodefense . NBT protokoły testowe obejmują znakowania immunologicznego BCIP /NBT roztworu substratu fosfatazy alkalicznej i wykrywanie galaktozydazy i alkalicznych działalności fosfatazy w tkance . Immunoblotting

Immunoblotting to technika wykorzystywana w celu wykrycia przeciwciał , które są białka zaangażowane w proces immunodefense , mówi Susan R. Haynes w " Protokołach interakcji białko-RNA . " Obejmuje to użycie NBT , jak również albuminę surowicy bydlęcej , pierwotne przeciwciała 9E10 , roztwór barwienia Comassie , membran nitrocelulozowych , roztwór buforowy Tris zasadowy , na siarczan amonowy , siarczan dodecylo sodowy i nasycony wodą butanolu .

BCIP /NBT roztworu substratu fosfatazy alkalicznej

Technicy przygotować roztwór trzy krople 1 procent fosforanu 5 - bromo -4 - chloro -3 -indolilu ( BCIP ) , trzy krople 1,5 procent NBT , dwie krople substancji chemicznej lewamizol i fosfatazy alkalicznej buforowym ( AP ) przy pH 9,5 , w zależności od strony IHC światowej. Roztwór inkubowano w temperaturze pokojowej i dostępne do użytku. Imperium Wykrywanie galaktozydazy i fosfatazy alkalicznej Rozrywki w tkance

galaktozydaz są enzymami , które mogą złamać cząsteczka galaktozyd , obecne w bakteriach Escherichia coli i innych organizmów. Zgodnie z protokołem Online, w tym protokole , biolodzy używać próbek komórek szczurów leczonych roztworem PBS , aldehyd glutarowy i paraformaldyde . Następnie przygotowuje się w buforze reakcji bromo - chloro -indolilu - galaktopiranozyd lub X - gal dla próbek , stosując żelazocyjanek potasu , chlorek magnezu, deoksycholan sodowy i detergentu Nonidet P -40 . Technicy mogą wykorzystywać błękit nitrotetrazoliowy ( NBT ) zamiast żelazocyjanku potasu w szybszym alternatywę. Próbki komórek są później obserwowane pod mikroskopem . Imperium