Sposób przeprowadzenia testu ELISA

analizie ELISA lub oznaczenie immunosorpcyjne związane z enzymem jesttechniką biochemiczną laboratorium wykonane w celu wykrycia antygenu (np. białko ) lub przeciwciał w próbce eksperymentalnej. Test wykorzystuje wiązania przeciwciało- antygen i mogą być stosowane do oznaczania inne komórki i molekularne mechanizmy wiążące jak również. W teście ELISA białka oparte"capture " Przeciwciało lub białko jest określone w naczyniu testowym i pozostawiono do przylgnięcia do naczynia , po czym" sonda " (taka jak własnego białka będącego przedmiotem zainteresowania ) jest położony i inkubowano ze środkiem wychwytującym . Po kilku praniach ," wykrywania " przeciwciało dodaje się w celu uwidocznienia obecności lub nieobecności przeciwciała lub białka antygenu białka wiążące. Rzeczy, które musisz
naczyniu testowym ( np. 96-dołkowe bloku )
Przechwytywanie przeciwciała ( rozcieńczyć do 5 ug /ml w 50 mM NaHCO2 , pH 9,6) Foto Probe przeciwciał /białka ( rozcieńczony do różnych stężenia ) in przeciwciała detekcyjnego ( np. sprzężonych z peroksydazą chrzanową przeciwciało )
buforem PT (1 x PBS , 0,05 procent Tween -20)
buforu blokującego (1 x PBS, 5 mg /ml BSA, lub 5 procent odtłuszczone mleko w 1x PBS )
odczynnika (np. wykrywanie mieszaniny odczynnika TMB ) Foto Mechanicznej laboratorium shakerze
pokój na zimno lub lodówka
pipetora i porad

Pokaż więcej instrukcji

1

Rozcieńczyć przeciwciała wychwytującego 5 ug /ml w 50 mM NaHCO2 (pH 9,6 ). Dodać 50 ul do każdego dołka na płytce użytej próbki do testowania. Pokrywa z tworzywa sztucznego lub z aluminium i inkubować przez noc w temperaturze 4 ° C na wytrząsarce .
2

Dump się przeciwciało wychwytujące i przemyć dwa razy 200 buforze ul PT . Dodać 200 ul na studzienkę buforu do blokowania ( PB lub 5 procent odtłuszczone mleko ). Inkubować w dowolnym miejscu od dwóch godzin, aby z dnia na dzień , podczas gdy drżenie w 4 stopniach C.
3

zrzuci buforze blokującym i przemyć 4 razy 200 buforze ul PT . Dodaj "sonda " Próbki białka w różnych stężeniach w PB lub 5 procent chudego mleka , dodając 100 ul na dołek . Inkubować jeden godzin z wytrząsaniem w 4 ° C. zrzucić rozwiązania sondy i przemywa sześć razy 200 ul buforu do PT .
4

Dodać przeciwciało wykrywające ( skoniugowane z HRP przeciwciało ) rozcieńczonego 1:4000 w buforze do PB lub 5 procent odtłuszczonego mleka ( albo jeden zawierający 0,05 procent Tween -20 ) , dodając 50 ul na studzience . Inkubuje się przez 30 minut do jednej godziny z wytrząsaniem w 4 ° C.
5

zrzutu z roztworu podstawowego przeciwciała do wykrywania i przemyć 6 razy porcjami po 200 ul na dołek buforem PT , po dwukrotnym przemyciu przy użyciu 200 uL 1x PBS (sól fizjologiczna buforowana fosforanami ) . Zrzucić PBS i dodano 100 ul odczynnika detekcyjnego na studzienkę ( dla HRP użyciu świeżo wymieszanego odczynnika TMB przez mieszanie substratu TMB i nadtlenek w stosunku 1:1 ) . Inkubować przez 15 minut w temperaturze pokojowej , wstrząsając od czasu do czasu . Łódź Przy użyciu HRP i TMB : Na koniec, dodano 100 fil 1 M kwas fosforowy ( H3PO4 ), do każdej studzienki w celu ugaszenia reakcji TBM Foto

odczytu płytki przy użyciu czytnika do analizy próbek, takich jak 96- studzienkowego czytnika płytek. . ( Na HRP i TMB , użyjszablonu " Punkt końcowy testu ELISA Test " dostępny na większości czytelników . ) Imperium