Wewnątrzkomórkowe barwienia Protokół cytometrii przepływowej

Cytometria przepływowa jestnarzędziem, które jest użyteczne w badaniach białek komórkowych. To wykorzystuje się emisję światła lub fluorescencji białek w komórce. Przeciwciała lub sondy z tagiem fluorescencji są wykorzystywane do badania konkretnych białek . Cytometria przepływowa jest stosowany do diagnozowania wielu chorób , w tym raka , ale jest również przydatne w badaniach medycznych. Ogniwa mocujące

Komórki powinny być przymocowane do utrzymania stabilności białek wewnątrzkomórkowych . Liczba utrwalaczy można stosować takie jak formaldehyd lub lodowato-zimnego acetonu . Po utrwaleniukomórki błony należy permealized umożliwićprzeciwciało wprowadzić do komórki . Detergenty , takie jak Triton lub NP -40 lub lodem metanol może być użyty do wykonania otworów w błonie komórkowej.
I przebarwiające Katowice Katowice

Komórki przemywa się w buforze blokującym 0,5 procent albumina surowicy bydlęcej rozcieńczonego w soli fizjologicznej buforowanej fosforanem , PBS /BSA . Komórki inkubuje się w buforze blokującym w celu zmniejszenia niespecyficznego wiązania. Dodanie pierwszego przeciwciała rozcieńczonego w buforze blokującym i pozostawić do inkubacji w temperaturze pokojowej , w celu optymalizacji czasu. Przemyć buforze blokującym . Imperium Analiza

Inkubować przeciwciało wtórne , które jest oznaczony znacznikiem fluorescencyjnym , w temperaturze pokojowej przez 30 minut . W celu usunięcia niezwiązanych komórek prania w buforze blokującym. Komórki wirującą do osadu , a następnie zawiesić w PBS i analizy na cytometrze przepływowym . Imperium