Różnica między bezpośrednim i pośredniej ELISA
enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA ) obejmuje reakcję kompleksu przeciwciało -enzym z antygenem albo przeciwciałem , która odbyła się nieruchomo w stałym podłożu. Na inkubacji enzymu sprzężonego z odpowiednim podłożem ,tworzy się produkt . Powstawanie produktu pozwala na wykrywanie obecności antygenu lub przeciwciała i jego ilość stanowi miarę ilości reakcji antygen -przeciwciało , który wystąpił. Test ELISA można przeprowadzić w dwóch postaciach : bezpośrednie i pośrednie. Format testu
w bezpośrednim teście ELISAprzeciwciało pierwszorzędowe odbywa się na ścianach płytki do mikromiareczkowania. Gdypróbkę podejrzewa się , że zawiera antygen dodaje jestreakcja antygen -przeciwciało. Następnie,przeciwciało drugorzędowe z enzymem , który jest zdolny do reakcji z antygenem jest dodany. Jeśli antygen jest obecny w próbce , to wiąże się to przeciwciało z enzymem . Pobezbarwny substrat dodaje się , jeślikolor, wskazuje to na obecność antygenu. W pośredniej ELISA , antygen jest utrzymywane na ścianach płytki do mikromiareczkowania. Gdypróbkę podejrzewa się , że zawiera przeciwciała dodaje zachodzireakcja antygen -przeciwciało. Następnie dodanoprzeciwciało drugorzędowe z enzymem zdolne do reakcji z regionu niezwiązanego przeciwciała. Kiedybezbarwny substrat dodaje , że prowadzi do rozwoju koloru , jeśli próbka zawiera przeciwciała stosowane .
Łatwość Testowanie
szeroki zakres znakowanych przeciwciał wtórnych są w handlu dostępne . Poza tym, możliwe jest utworzenie kilku pierwotnych przeciwciał u danego gatunku , i taki sam wtórnego przeciwciała do detekcji. To sprawia, żepośrednia ELISA łatwe do wykonania. W bezpośrednim ELISA pierwotne przeciwciała mają być specjalnie przygotowany do reakcji ze specyficznym antygenem podejrzewa się być obecna w próbce. To sprawia, żebezpośredni ELISA niekorzystne w porównaniu do badania pośredniego. Imperium szybkość testowania
bezpośredniego testu ELISA jest szybkie w porównaniu do badania pośredniego , ponieważ Użyto tylko pojedynczego przeciwciała . Pośredni ELISA wymaga dodatkowego etapu inkubacji z drugim przeciwciałem w czasie procedury testowej , co powoduje opóźnienia w uzyskaniu wyników .
Czułość
bezpośredniego testu ELISA jest mniej wrażliwe niż postać pośredniego testu , ponieważ istnieje znacznie mniejsze wzmocnienie sygnału . Poza tym,etykietowanie pierwotnego przeciwciała z enzymem może zaszkodzić jej profil immonoreactivity . W przypadku pośredniego testu ELISApierwszorzędowe przeciwciało nie jest opisane i dlatego zachowuje swoją reaktywność immunologiczną . Ponadto, każde przeciwciało pierwotne ma wiele epitopów , które wiążą się z przeciwciałem wtórnym , co pozwala na wzmocnienie sygnału , poprawa czułości metody. Istnieje jednakszansa reaktywności krzyżowej między antygenem i przeciwciałem wtórnym , co prowadzi do błędów w wynikach . Nie ma takiej możliwości w bezpośredniej metody ELISA . Imperium
