Protokoły retrowirusa infekcji

zawierające genom RNA , który jest zamknięty w kapsydzie i lipidów koperty Retrowirusy zawierają łańcuchy polipeptydowe , które pozwalają połączyć je z receptorami w błonie komórek gospodarza infekują . Natomiast dziedziczna informacja większości komórek " jest zakodowane w DNA , które z retrowirusów jest zawarty w RNA; retrowirusy prowadzą równieżenzym odwrotnej transkryptazy , co pozwala im stosować się do DNA gospodarza . Niektóre protokoły , a następnie w laboratoriach celowego zakażenia komórki DNA z tymi wirusami . Przygotowanie laboratorium

Certain sprzęt laboratoryjny i materiały są niezbędne do pomocy w procesie zakażenia retrowirusowego . Wyposażenie obejmuje 1 pomocy pipety , 1 pipety 1 -man , kultury, tkanki kaptur 37 stopni Celsjusza i 32 stopni Celsjusza, inkubatory oraz wirówki Eppendorf . Dostawy obejmują hodowli tkankowej , talerze jednorazowe pipety Pasteura , wykwalifikowaną supernatantu retrowirusowego sterylizowane , filtr i filtr polibrenu sterylizowane siarczan protaminy .
Przygotowanie komórka do infekcji

Przed na zakażenie komórki docelowej musi być podzielona na płytce do hodowli tkanek i inkubowano przez noc w temperaturze 37 stopni Celsjusza w inkubatorze z pięciu procent CO2. Celem okresu inkubacji jest tworzenie komórek, które są w 50 % konfluencji . Przygotowanie komórek wcześniej konieczne jest zapewnienie , że komórki są optymalne dla procesu infekcji . Nolan Lab na Uniwersytecie Stanforda zaleca zakażenie komórek zawsze zaczynają rozpoczęcia przez zainfekowanie komórek NIH 3T3 , aby pomóc w optymalizacji wyników testu . Imperium zainfekowanie komórek

Po okresie inkubacji jest ponad, naukowcy powinni zapewnić , że komórki są zarówno zdrowe i prawego ujścia . Stosując osłonę hodowli tkankowej ,niezależnie od komórek odessano isupernatant wirusowy stosuje się do komórek. Po nałożeniu ,płyta powinna być delikatnie kołysała się w celu zapewnienia , że jest równomiernie rozłożona . Komórki powinny być następnie wirowanie inokulowano przez umieszczenie ich w wirówce Eppendorfa i wiruje je przy 2500 obrotach na minutę przez dziewięćdziesiąt minut w temperaturze 30 stopni Celsjusza. Następnie , komórki powinny być inkubowane w 32 stopniach Celsjusza przez jeden do dwóch dni. Wirus jest następnie zastąpiona wyodrębnionych komórek i umieszczone w inkubatorze do analizy w czasie od trzech do siedmiu dni po początkowej infekcji . Imperium