Zamrażanie komórek Protokół

Zachowanie komórek przez zamrażanie jest niezbędna do badań , weterynarii i hodowli zwierząt, ponieważ umożliwia komórkom , które mają być przechowywane przez długie okresy czasu. Sposób zamrażania wybrano jednak należy zmniejszyć lub uniknąć uszkodzenia komórki. Środek kriokonserwacji i sposobu może zależeć od typu komórki. Przygotowanie

Komórki powinny zostać zamrożone , gdy są zdrowe i aktywnego wzrostu o 90 procent rentowności . Należy zachować ostrożność i wirowanie na obsługę szybkich i energicznych pipetowania lub odsysanie należy unikać , aby utrzymać rentowność i uniknąć uszkodzenia komórek.
Krioprotekcji

środek krioprotekcji jest stosowany jako zamiennik wody wewnątrzkomórkowej . Środek zapobiega kryształów lodu i odwodnienie występujących w komórkach. Sterylizowany glicerol i sterylizowane dimetylu są często stosowane w stężeniu 5 procent do 15 procent ( objętość na objętość ) rozcieńcza się w obu płodowej surowicy cielęcej lub mediów wzrostu , w zależności od typu komórki .

Zamrażania i bagażu

Komórki w mieszaninie zamrażania powinien być chłodzony powoli . Jeślizamrażarka jest programowany dostępne kriofiolek mogą być pakowane w tkance lub umieszczone w styropianu , który może spowolnić proces zamarzania . Komórki powinny być przechowywane w -80 stopniach Celsjusza przez 24 godzin, a następnie przenosi się do ciekłego azotu w celu przechowywania długoterminowego.
Zbiory rozmrażania

Zamrożone komórki powinny być szybko rozmrożone. W łaźni wodnej w 37 ° C może być stosowany . Należy zachować ostrożność, komórki przechowuje się w ciekłym azocie , jednak, jak ciekły azot można wprowadzać do fiolek i może eksplodować rozmrażania. Mieszaninę zamrażania powinny zostać rozcieńczone w pożywce wzrostowej. Żywotność komórek powinny być oceniane z barwnikiem niebieskim i Trypan komórek hodowanych jako normalne. Imperium