Sekwencjonowanie końca N Protokół

degradacji Edmana -znany sposób identyfikacji aminową N - końcowego aminokwasu białka - wymaga rozszczepienie aminokwasu , a następnie identyfikację za pomocą elektroforezy lub chromatografii . Zautomatyzowane procesy przyspieszyć sekwencji N-końcowej . Fakty

Białka wytwarzane wewnątrz poszczególnych komórek działają jako hormonów , enzymów i innych ważnych organów regulacyjnych . Genetyczna mutacja w wyniku nienormalnego białka może mieć poważne konsekwencje zdrowotne.
Sposób

amino N - końcowy aminokwas jest odcinana przez reakcję z jednym z kilku odczynników , a następnie hydrolizuje w celu utworzenia oddzielnej aminokwas . Chromatografia cienkowarstwowa , HPLC i elektroforezy określa rozmiar aminokwasu i porównuje go ze znanym standardem wielkości. Nowy N -koniec pozostałego białka może być podobnie łupane do identyfikacji.

Automatyka

Applied Biosystems prowadził rozwój automatyzacji degradacji Edmana , który oczyszczone białko wiąże się z błoną i traktuje go fenylu. Aminokwasem automatycznie wstrzykuje się do systemu HPLC do identyfikacji.
Kliparty powikłań

Białka muszą pozostać stosunkowo czyste i wolne od zanieczyszczeń , aby dokładnie określić amino kwas N-końcowej . Ograniczenia degradacji Edmana wymagają dużych cząsteczek białka rozdrobniony na małe nie dłuższych łańcuchów peptydowych 50 aminokwasów. Imperium