Jak zrobić ograniczenie mapie

w pierwszych dniach biologii molekularnej naukowcy powszechnie stosowane mapowanie restrykcyjne zrozumieć geny były studia . W nowoczesnych laboratoriach badawczych , mapowanie restrykcyjne , ponieważ w dużej mierze nieaktualne sekwencjonowanie stał się bardziej dostępne i bardziej ekonomiczne niż w przeszłości . Jednakże istnieją przypadki, w którychmapie ograniczenie może być odpowiednia dla badacza przeprowadzenia jej badania . Ogólne podejście do mapowania restrykcyjnego obejmuje wykorzystanie enzymów trawiennych przełamania fizycznie próbkę DNA. Po mierzyć produkty tego trawienia , można " zmontować " kawałki i wydedukować oryginalnej sekwencji DNA . Rzeczy, które musisz Foto enzymami restrykcyjnymi Foto próbki DNA
roztworu buforu
lodzie i gorącej kąpieli wodnej
żel do elektroforezy sprzętu

Pokaż więcej instrukcji
DNA Trawienie

1

Dodaj enzymu restrykcyjnego do próbki DNA . Użyj EcoR1 , powszechnie stosowany enzym, na przykład .
2

Dodaj tę mieszaninę do roztworu buforowego , który jest w zasadziemiejsce dla reakcji występuje.
3

podniesienia temperatury reakcji, jak podano w instrukcji New England Biolabs . Każdy enzym restrykcyjny ma określoną temperaturę reakcji , które funkcjonuje najlepiej . Dodatkowo , każdy enzym ma specyficzną sekwencję nukleotydów jest zaprojektowany do celu. EcoRI skanuje i cięcia DNA w sekwencji nukleotydów CAATTC . Ta dokładna kolejność nukleotydów musi istnieć dla enzymu do wiązania i cięcia DNA . Do tego czasu , wszystkie materiały powinny być przechowywane na lodzie w celu zapobiegania niepożądanej aktywności .
4

Pozostawionoreakcja zachodzi , jak wskazano w podręczniku uruchomić mieszaniny w urządzeniu do elektroforezy na żelu w celu oddzielenia DNA fragmenty na podstawie wielkości . Najmniejsze fragmenty ruszy najdalej na cały żel .
5

Zmierz odległość pokonaną przez każdego fragmentu DNA . Te pięć kroków, należy powtórzyć z wielu różnych enzymów osobno .
Konstruowanie mapy restrykcyjnej
6

Wykorzystując dane uzyskane z żelu , zebrać wszystkieinformacje, które znalazły przy użyciu różnych enzymów restrykcyjnych.
7

Wydedukuj kolejność miejsc restrykcyjnych przez porównanie różnych długościach fragmentów wytworzonych przez każdy enzym. Na przykład, jeśli enzym 1 wytwarza dwa fragmenty o jednakowej długości i enzymów 2 wytwarza trzy fragmenty o równej długości , można stwierdzić, że enzym # 1 cięć w połowie DNA i enzymu 2 przecina DNA na trzy części . Łódź
8

Korzystanie z wniosków wyciągniętych w kroku 2 , montaż kolejność miejsc restrykcyjnych DNA . Imperium