Przylegające komórki Protokół

Komórki w hodowli są albopostać hodowane w zawiesinie , takich jak komórki krwi lub komórek, takich jak fibroblasty , które wymagają powierzchni , do którego mogą przylegać . Niektóre z tych powierzchni mogą wymagać powłok w różnych matryc zewnątrzkomórkowych w zależności od rodzaju i badanie komórek. Wszystkie hodowle komórkowe wymagają do wykonania nie aseptycznych. Optymalne Środowisko

większość typów komórek można hodować w pożywce Eagle'a zmodyfikowanej przez Dulbecco ( DMEM ) lub Roswell Park Memoriał Institute ( RPMI ), z dodatkiem 10 procent płodowej surowicy cielęcej , 2 milimoles o kwas amino glutaminy oraz antybiotyki , na przykład , 100 jednostek penicyliny i 0,1 miligramów na mililitr streptomycyny . Komórki są utrzymywane w ich mediach w wilgotnym inkubatorze w 37 ° C i 5 procent dwutlenku węgla .
Dzielenie

Komórki powinny być sprawdzane codziennie zakażenia , śmierć lub wzrostu . Pohodowli tkankowej kolby wynosi 80 procent powlekanych w komórkach , komórki powinny być podzielone na utrzymanie zdrowia CELLS ' i fazy logarytmicznej wzrostu . Media usunięto , a komórki przemyto solą fizjologiczną buforowaną fosforanem . Przylegające komórki wymagają dodawania trypsyny i kwas etylenodiaminotetraoctowy (EDTA ) w celu usunięcia białek adhezji komórkowej. Delikatne pobudzenie powinno usunąć komórki . Potrzebuje mediów należy dodać do zobojętnienia roztworu trypsyny /EDTA .

Subkulturze

rozwodniony komórki i rozwiązanie tryspin /EDTA można wirować do osadzenia i mycia komórki . Komórki mogą być ponownie zawieszono i rozcieńczono w pożywce i zmianę płytek do nowych kolb . Za każdym razem, gdy komórki są podzielonenumer komórki przejście jest zwiększony o jeden .
Mediów Zmień

media powinny być zmieniane dwa razy w tygodniu przez usunięcie starych mediów i zastąpienie nowy , ogrzewa media. Imperium