Czy do wykonania western blot można zastosować serum?
Chociaż możliwe jest użycie surowicy do przeprowadzenia Western blot, generalnie nie jest to zalecane. Surowica to złożona mieszanina zawierająca komórki i białka, w tym te, które mogą zakłócać wykrywanie określonych białek będących przedmiotem zainteresowania. Ponadto surowica może mieć wysoki sygnał tła, co może utrudniać wykrycie białek o niskiej liczebności. Z tych powodów oczyszczone próbki białek są zwykle stosowane w analizie Western blot.
Jednakże w niektórych przypadkach konieczne lub korzystne może być zastosowanie surowicy do analizy Western blot. Na przykład, jeśli białko będące przedmiotem zainteresowania występuje w niewielkiej ilości w oczyszczonej próbce białka, użycie surowicy może zwiększyć szansę na wykrycie białka. Dodatkowo surowicę można wykorzystać do badania interakcji białko-białko lub do wykrywania przeciwciał przeciwko określonym białkom.
Jeśli do analizy Western blot konieczne jest użycie surowicy, ważne jest podjęcie kroków w celu zminimalizowania potencjalnej interferencji i sygnału tła. Te kroki mogą obejmować:
* Przygotowanie próbki surowicy poprzez wirowanie w celu usunięcia resztek komórkowych i nierozpuszczalnych cząstek.
* Rozcieńczanie próbki surowicy w celu zmniejszenia stężenia substancji zakłócających.
* Stosowanie środka blokującego, takiego jak albumina surowicy bydlęcej (BSA), w celu zminimalizowania nieswoistych interakcji.
* Optymalizacja warunków Western blot, takich jak stężenia przeciwciał i czas inkubacji, w celu zmniejszenia sygnału tła.
Ogólnie rzecz biorąc, chociaż generalnie nie zaleca się stosowania surowicy do analizy Western blotting ze względu na możliwość wystąpienia zakłóceń i sygnału tła, w niektórych przypadkach może być to konieczne lub korzystne. Podczas stosowania surowicy niezbędna jest staranna optymalizacja warunków Western blot.
